Integrin β8/ITGB8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401379-ACT

ITGB8 kodiert die Integrin-β8-Untereinheit, die sich mit αv zu dem αvβ8-Rezeptor paart, der die Zell‑Matrix‑Adhäsion sowie eine bidirektionale Signalübertragung zwischen der extrazellulären Matrix und dem Zytoskelett vermittelt. Integrin β8 ist ein zentraler Regulator der Aktivierung von latentem TGF‑β und der nachgeschalteten, SMAD‑abhängigen Transkriptionsprogramme und beeinflusst damit epithel‑mesenchymale Interaktionen, zytoskelettale Dynamik und Gewebeumbau. Durch Crosstalk mit Signalwegen der fokalen Adhäsion, Rho‑GTPasen und MAPK beeinflusst ITGB8 Zellmigration, Barrierefunktion und die Modulation des Immunmikromilieus. Veränderte ITGB8-Expression oder αvβ8‑Aktivität wurde mit fibrotischem Remodeling und tumorassoziierten Invasionsprogrammen in Verbindung gebracht, was ITGB8 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur TGF‑β‑Biologie und integrinabhängigen Signalübertragung macht.

Integrin β8/ITGB8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGB8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin β8/ITGB8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGB8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGB8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin β8/ITGB8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGB8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin β8/ITGB8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin β8/ITGB8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGB8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.