Plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α7/ITGA7 (m): sc-421165

Présentation

Itga7 code l’intégrine α7 (ITGA7), une sous-unité α qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β1 pour former un récepteur de la laminine, enrichi dans les muscles squelettique et cardiaque. Ce récepteur d’adhérence couple la matrice extracellulaire au cytosquelette d’actine et contribue à l’adhésion, à la migration et à la différenciation des myoblastes, tout en modulant la signalisation via les complexes d’adhérence focale impliquant FAK/Src, ILK, ainsi que les voies PI3K–AKT et MAPK en aval. La mécanotransduction dépendante d’ITGA7 soutient la stabilité des fibres musculaires et l’organisation de la jonction neuromusculaire, reliant les signaux de laminine extracellulaire au remodelage intracellulaire du cytosquelette. Une altération de la fonction ou de l’expression d’ITGA7 est associée à une intégrité musculaire compromise et à des phénotypes de type dystrophique dans des systèmes modèles, ce qui en fait une cible utile pour étudier le développement musculaire, la régénération et la signalisation de la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α7/ITGA7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Itga7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Itga7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Itga7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Integrin α7/ITGA7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Itga7 pour l'étude de la signalisation de Integrin α7/ITGA7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Itga7 essentiels à la fonction de Integrin α7/ITGA7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Itga7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Integrin α7/ITGA7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Integrin α7/ITGA7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Itga7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Integrin α7/ITGA7 plasmide HDR (m) et le Integrin α7/ITGA7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Itga7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Itga7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.