Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421177

概要

Itgb5 はインテグリンβ5（integrin β5）をコードする遺伝子で、主にインテグリンαVとヘテロ二量体を形成して αVβ5 を構成する膜貫通型の接着受容体である。これにより、ビトロネクチンなどの細胞外マトリックス（ECM）リガンドへの細胞接着が可能となる。αVβ5 は、フォーカルアドヒージョンの形成と双方向性シグナル伝達を介して細胞骨格の再編を調節し、FAK/Src、PI3K–AKT、MAPK/ERK などの経路を活性化して、遊走・生存・増殖を協調的に制御する。さらに ITGB5 は、組織リモデリング、血管新生応答、上皮—間葉（EMT）ダイナミクスに影響するエンドサイトーシスやメカノトランスダクションの過程にも関与する。インテグリンシグナルの破綻や、β5 依存的な接着プログラムの変化は、線維化、腫瘍進展、炎症性微小環境のリモデリングのモデルにおいて関与が示唆されており、接着駆動性表現型の機序研究における有用性を支持している。

Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるItgb5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Itgb5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Itgb5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Integrin β5/ITGB5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Integrin β5/ITGB5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Itgb5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Integrin β5/ITGB5の機能に不可欠なItgb5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Itgb5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIntegrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Itgb5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Integrin β5/ITGB5 HDRプラスミド（m）および Integrin β5/ITGB5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはItgb5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のItgb5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。