Plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin β5/ITGB5 (m): sc-421177

Présentation

Itgb5 code l’intégrine β5, un récepteur d’adhérence transmembranaire qui s’associe principalement à l’intégrine αV pour former le dimère αVβ5, permettant l’ancrage des cellules à des ligands de la matrice extracellulaire tels que la vitronectine. Via l’assemblage des adhérences focales et une signalisation bidirectionnelle, αVβ5 module le remodelage du cytosquelette et active des voies incluant FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK/ERK, qui coordonnent la migration, la survie et la prolifération. ITGB5 contribue également à des processus d’endocytose et de mécanotransduction qui influencent le remodelage tissulaire, les réponses angiogéniques et la dynamique épithélio-mésenchymateuse. Une signalisation des intégrines dérégulée et des programmes d’adhérence dépendants de β5 altérés ont été impliqués dans des modèles de fibrose, de progression tumorale et de remodelage du microenvironnement inflammatoire, ce qui soutient son intérêt pour des études mécanistiques des phénotypes pilotés par l’adhérence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin β5/ITGB5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Itgb5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Itgb5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Itgb5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Integrin β5/ITGB5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Itgb5 pour l'étude de la signalisation de Integrin β5/ITGB5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Itgb5 essentiels à la fonction de Integrin β5/ITGB5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Itgb5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Integrin β5/ITGB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Integrin β5/ITGB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Itgb5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Integrin β5/ITGB5 plasmide HDR (m) et le Integrin β5/ITGB5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Itgb5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Itgb5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.