Plasmide Double Nickase (h) Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-400573-NIC

ITGB4 code l’intégrine β4 (CD104), un récepteur d’adhérence transmembranaire qui s’associe principalement à l’intégrine α6 pour former le dimère α6β4, composant central des hémidesmosomes reliant les cellules épithéliales à la membrane basale via les laminines. En se couplant aux filaments intermédiaires et grâce à des interactions avec les adhérences focales et la signalisation des facteurs de croissance, ITGB4 régule la polarité cellulaire, l’organisation du cytosquelette et la migration, avec des effets en aval sur les voies PI3K–AKT, MAPK et dépendantes des GTPases Rho. Une expression ou une localisation altérée d’ITGB4 est associée à une intégrité épithéliale dérégulée et à une augmentation du comportement invasif dans de multiples contextes de carcinomes, et des variants pathogènes sont liés à des dermatoses bulleuses impliquant une adhésion dermo-épidermique compromise. Ces caractéristiques biologiques font d’ITGB4 une cible utile pour étudier la signalisation dépendante de l’adhérence, le remodelage épithélial et les phénotypes induits par la matrice extracellulaire.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGB4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGB4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGB4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.