Plasmide Double Nickase (m) Integrin α4/ITGA4/CD49d: sc-421162-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Integrin α4/ITGA4/CD49d correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickase (m) et le plasmide Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Itga4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Integrin α4/ITGA4/CD49d Antibody (B-2): sc-376334
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Integrin α4/ITGA4/CD49d | sc-421162-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Itga4* code l’intégrine α4 (ITGA4/CD49d), un récepteur d’adhérence qui s’associe à β1 ou β7 pour former les intégrines VLA-4 ou α4β7, lesquelles régulent le trafic leucocytaire, l’adhérence ferme et la transmigration via des partenaires de liaison tels que VCAM1 et la fibronectine. La signalisation « outside-in » médiée par ITGA4 coordonne le remodelage du cytosquelette et des programmes de survie via des nœuds de signalisation des adhérences focales, notamment FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK, reliant l’engagement avec la matrice extracellulaire à l’expression génique et à la motilité. En immunologie et en biologie vasculaire, les intégrines α4 influencent le recrutement des cellules inflammatoires, le homing des cellules hématopoïétiques et l’extravasation spécifique des tissus, des processus fréquemment étudiés dans des modèles d’auto-immunité, de neuroinflammation et d’infiltration leucocytaire associée aux tumeurs. Une activité d’ITGA4 dérégulée est également étudiée dans des contextes d’inflammation chronique et de formation de niches métastatiques, où des dynamiques d’adhérence altérées modèlent la localisation cellulaire et le dialogue avec le microenvironnement.
Integrin α4/ITGA4/CD49d Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Itga4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Itga4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Itga4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Itga4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.