Partículas Lentivirales de Activación (h) INPP5E: sc-405923-LAC

INPP5E codifica la fosfatasa de inositol polifosfato-5 E, una 5-fosfatasa de fosfoinosítidos que hidroliza PI(4,5)P2 y PI(3,4,5)P3 para modelar la composición de fosfoinosítidos de membrana. INPP5E está enriquecida en el cilio primario y contribuye a la identidad de la membrana ciliar, al tráfico y a la señalización, incluida la modulación de la actividad de la vía Hedgehog y, de forma más amplia, de la dinámica de señalización lipídica vinculada a PI3K–AKT. Al controlar gradientes de fosfoinosítidos, INPP5E ayuda a coordinar la ciliogénesis, la localización de receptores y las respuestas posteriores de segundos mensajeros. La alteración de la función de INPP5E se asocia con fenotipos de ciliopatía y trastornos del neurodesarrollo, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la señalización dependiente de cilios y de la regulación de lípidos de membrana.

Las partículas de activación lentiviral INPP5E (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de INPP5E en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral INPP5E (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción INPP5E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de INPP5E. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo INPP5E y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.