Plasmide CRISPR/Cas9 KO ILKAP (h): sc-405879

Présentation

ILKAP (phosphatase sérine/thréonine 2C associée à l’integrin-linked kinase, ILK) code une phosphatase de la famille PP2C qui s’associe à des complexes de signalisation liés aux intégrines et module le contrôle, dépendant de la phosphorylation, de l’adhérence cellulaire et de l’organisation du cytosquelette. En déphosphorylant des substrats spécifiques au sein des voies associées aux intégrines et à la matrice extracellulaire (ECM), ILKAP peut influencer la migration cellulaire, la mécanotransduction et les sorties de signalisation en réponse aux facteurs de croissance. Des altérations de l’expression ou de l’activité d’ILKAP ont été étudiées dans des contextes impliquant une signalisation d’adhérence dérégulée, des réponses au stress et un remodelage des voies favorisant des phénotypes malins. Ainsi, ILKAP est fréquemment examinée dans des modèles d’invasion des cellules tumorales, de signalisation de survie et de régulation de la prolifération dépendante de l’adhérence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ILKAP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ILKAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ILKAP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ILKAP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ILKAP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ILKAP pour l'étude de la signalisation de ILKAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ILKAP essentiels à la fonction de ILKAP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ILKAP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ILKAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ILKAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ILKAP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ILKAP plasmide HDR (h) et le ILKAP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ILKAP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ILKAP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.