Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-33: sc-417699-ACT

Le gène humain IL33 code l’IL-33, une cytokine associée au noyau de la famille de l’IL-1, qui agit comme une alarmin libérée lors d’un stress cellulaire ou de dommages tissulaires afin d’activer les réponses immunitaires innées et adaptatives. L’IL-33 extracellulaire signale principalement via le complexe récepteur ST2/IL1RL1 pour stimuler l’activation des voies NF-κB et MAPK, modulant l’inflammation de type 2, l’activation des cellules myéloïdes et les programmes de réparation tissulaire. L’IL-33 influence le dialogue entre épithélium, stroma et système immunitaire dans les tissus barrières et a été impliquée dans l’inflammation allergique des voies aériennes, les maladies atopiques et d’autres contextes d’inflammation chronique. Une activité dérégulée de l’IL-33 est également associée à la fibrose et à des altérations de la signalisation du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des circuits inflammatoires.

IL-33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL33 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL33 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL33, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-33. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL33 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-33 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-33 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL33 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.