Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IL-1RI Double Nickase Plasmid (m): sc-421098-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-1RI Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-1RI Double-Nickase-Plasmid (m) und IL-1RI Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Il1r1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-1RI: sc-393998
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-1RI Double Nickase Plasmid (m) | sc-421098-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-1RI Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421098-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il1r1 kodiert den murinen IL‑1RI, den primären Signalrezeptor für Interleukin‑1α und Interleukin‑1β, der an der Zelloberfläche die angeborene Immunaktivierung einleitet. Nach Ligandenbindung werden das IL‑1‑Rezeptor‑Accessory‑Protein und MyD88 rekrutiert und bilden einen Signalkomplex, der IRAK‑TRAF6‑Kaskaden antreibt und schließlich zur Aktivierung von NF‑κB und MAPK sowie zu einer breiten Induktion inflammatorischer Genprogramme führt. Über diese Signalwege reguliert IL‑1RI in vielen Zelltypen die Produktion von Zytokinen und Chemokinen, die Rekrutierung von Leukozyten, Fieberreaktionen und den Gewebeumbau. Eine fehlregulierte IL‑1RI‑Signalübertragung ist in Modellen der Autoinflammation, arthritisähnlicher Gelenkpathologie, Neuroinflammation und metabolischer Inflammation beteiligt, was Il1r1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die mechanistische immunologische Forschung macht.
IL-1RI Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Il1r1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Il1r1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Il1r1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Il1r1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.