Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-1 beta/IL1B: sc-400078-ACT

IL1B code l’interleukine-1 bêta (IL‑1β), une cytokine pro-inflammatoire produite principalement par des monocytes et des macrophages activés, puis maturée après un clivage dépendant de la caspase‑1 au sein de l’inflammasome. La signalisation de l’IL‑1β via IL1R1 et IL1RAP active des voies dépendantes de MyD88 qui convergent vers NF‑κB et les cascades MAPK, déclenchant des programmes transcriptionnels impliqués dans le recrutement des leucocytes, la fièvre et les réponses de phase aiguë. Cet axe module l’activation de l’immunité innée, les sorties inflammatoires associées à la pyroptose et la communication avec des cytokines telles que l’IL‑6 et le TNF. Une expression dérégulée d’IL1B et une activité anormale de l’inflammasome sont impliquées dans des pathologies inflammatoires chroniques et auto-immunes, l’inflammation métabolique et l’inflammation associée aux tumeurs dans de multiples contextes tissulaires.

IL-1 beta/IL1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-1 beta/IL1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-1 beta/IL1B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-1 beta/IL1B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-1 beta/IL1B dans les cellules tumorales présentant une expression de IL1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.