Plásmido Doble Nickase (h) IKKβ: sc-400247-NIC

IKBKB codifica IKKβ, el núcleo catalítico del complejo IKK que fosforila las proteínas IκB para desencadenar su ubiquitinación y degradación, lo que permite la translocación nuclear de los factores de transcripción NF-κB. A través de esta vía canónica de NF-κB, IKKβ integra señales de receptores como TNFR y TLR/IL-1R para coordinar la expresión génica inflamatoria, las respuestas inmunitarias innatas, los programas de supervivencia celular y la adaptación al estrés. La actividad desregulada de IKBKB se ha vinculado con la señalización persistente de NF-κB observada en contextos inflamatorios y autoinmunes, así como en la biología tumoral, donde puede influir en la proliferación, la resistencia a la apoptosis y las redes de citocinas del microambiente. Como nodo central de señalización, IKKβ se investiga con frecuencia por sus funciones en la transcripción impulsada por citocinas, el crosstalk de la vía con MAPK y las respuestas a interferón, y los cambios del fosfoproteoma dependientes del estímulo.

IKKβ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IKBKB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IKBKB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IKBKB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IKBKB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.