IFN-γRα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401191-ACT

IFNGR1 codifica a cadeia alfa do receptor humano de interferon-γ (IFN-γRα), a subunidade de ligação ao ligante que inicia a sinalização do interferon-γ na superfície celular. Após a ligação do IFN-γ, a IFN-γRα coopera com o IFNGR2 para ativar JAK1/JAK2 e, a jusante, o STAT1, impulsionando programas transcricionais que regulam a apresentação de antígenos, a ativação de macrófagos e respostas antimicrobianas e inflamatórias. Essa via se integra a redes de IRF/ISG e molda o crosstalk de citocinas que influencia a vigilância imune e a inflamação tecidual. A sinalização desregulada de IFNGR1 tem sido associada a alterações na defesa do hospedeiro e a patologias mediadas pelo sistema imune, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de biologia de infecções, inflamação e sinalização em imuno-oncologia.

IFN-γRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNGR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFN-γRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNGR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNGR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFN-γRα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNGR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFN-γRα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFN-γRα em células tumorais com expressão de IFNGR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.