Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFN-α/βRα: sc-401662-ACT

IFNAR1 code pour la sous-unité alpha du récepteur de l’interféron α/β (IFN-α/βRα), une sous-unité essentielle située à la surface cellulaire du complexe récepteur des interférons de type I, qui se lie à l’IFN-α et à l’IFN-β pour déclencher une signalisation antivirale et immunomodulatrice. La liaison du ligand active JAK1/TYK2 ainsi que les programmes transcriptionnels en aval STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3), induisant des gènes stimulés par l’interféron qui façonnent l’immunité innée, la présentation de l’antigène et le niveau d’inflammation. Les voies dépendantes d’IFNAR1 croisent les signalisations NF-κB et MAPK et influencent la survie cellulaire, la différenciation et les réseaux de cytokines au sein des compartiments immunitaires et stromaux. Une dérégulation de la signalisation via IFNAR1 est impliquée dans des réponses antivirales altérées et des phénotypes immunitaires entraînés par l’interféron, pertinents pour la biologie des infections, les signatures associées à l’auto-immunité et les interactions tumeur–système immunitaire.

IFN-α/βRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFNAR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFN-α/βRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFNAR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFNAR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFN-α/βRα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFNAR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFN-α/βRα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFN-α/βRα dans les cellules tumorales présentant une expression de IFNAR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.