IFITM5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-428653

Descripción general

Ifitm5 codifica la proteína transmembrana inducida por interferón 5 (IFITM5), una pequeña proteína asociada a la membrana con una expresión muy restringida a células del linaje osteoblástico y un papel clave en la mineralización del esqueleto. IFITM5 contribuye a la diferenciación de los osteoblastos y al depósito de la matriz extracelular, influyendo en procesos como la organización del colágeno y la formación de hidroxiapatita durante el desarrollo y la remodelación ósea. La alteración genética de IFITM5 se asocia con propiedades anómalas de la matriz ósea y se ha vinculado a fenotipos de osteogénesis imperfecta, por lo que es relevante para estudios sobre fragilidad ósea y acumulación mineral deficiente. En modelos murinos, Ifitm5 ofrece un punto de entrada manejable para diseccionar vías intrínsecas del osteoblasto que controlan la calidad ósea y las respuestas a señales del desarrollo y a estímulos inflamatorios.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IFITM5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ifitm5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ifitm5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ifitm5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IFITM5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ifitm5 para la investigación de la señalización de IFITM5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ifitm5 críticos para la función de IFITM5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ifitm5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IFITM5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IFITM5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ifitm5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IFITM5 (m) y el plásmido HDR IFITM5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ifitm5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ifitm5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.