IFI-16 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416568-ACT

ヒトIF​​I16（IFI-16）は核内DNAセンサーであり、インターフェロン誘導性タンパク質として、異常または外来性の核酸に対する自然免疫の監視機構の協調に寄与します。IFI-16はSTING依存性のインターフェロンシグナル伝達やインフラマソーム関連応答に関与し、抗ウイルス防御、細胞周期制御、クロマチン関連の制御に結びつく転写プログラムに影響を与えます。DNA損傷応答や転写装置との相互作用を介して、IFI-16は細胞ストレス応答や細胞老化に関連する経路を調節し得ます。IFI16活性の破綻（調節異常）は、炎症性シグナル、ウイルス制限表現型、免疫関連疾患の機序と関連づけられており、核酸センシングとインターフェロン経路間のクロストークを研究するうえで有用な結節点となります。

IFI-16 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFI16の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFI-16 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFI16 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFI16転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFI-16の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFI16遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFI-16依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFI16発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFI-16経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。