Plasmide CRISPR d'Activation (h) Id3: sc-400944-ACT

ID3 code la protéine humaine Id3, un régulateur transcriptionnel à motif hélice‑boucle‑hélice (HLH) dépourvu de domaine de liaison à l’ADN, qui module l’expression génique en séquestrant les protéines E et d’autres facteurs bHLH. Par ce mécanisme dominant négatif, Id3 influence l’engagement de lignée, la progression du cycle cellulaire et les programmes de différenciation dans des contextes immunitaires, vasculaires et épithéliaux, en s’intégrant à des signaux tels que TGF‑β/BMP et aux voies mitogènes. Une activité d’ID3 altérée a été associée à une prolifération et une différenciation dérégulées, avec une implication rapportée dans des états transcriptionnels oncogéniques, le remodelage vasculaire et la fonction des cellules immunitaires. Ces caractéristiques font d’ID3 un nœud utile pour étudier l’équilibre des réseaux transcriptionnels, les décisions de destin cellulaire dépendantes du contexte et la plasticité phénotypique pilotée par les voies de signalisation.

Id3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ID3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Id3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ID3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ID3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Id3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ID3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Id3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Id3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ID3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.