Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ICAM-1/CD54 Double Nickase Plasmid (m): sc-421013-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ICAM-1/CD54 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ICAM-1/CD54 Double-Nickase-Plasmid (m) und ICAM-1/CD54 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Icam1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ICAM-1/CD54: sc-8439
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ICAM-1/CD54 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421013-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Icam1 kodiert das interzelluläre Adhäsionsmolekül 1 (ICAM-1/CD54), einen induzierbaren Rezeptor der Immunglobulin-Superfamilie, der während Entzündungen auf Endothelzellen, Leukozyten sowie vielen stromalen und epithelialen Zelllinien exprimiert wird. ICAM-1 bindet Integrine wie LFA-1 (ITGAL/ITGB2) und Mac-1 (ITGAM/ITGB2) und unterstützt dadurch feste Adhäsion, Transmigration und die Stabilisierung der immunologischen Synapse, wodurch zytokingesteuerte Programme mit Signalübertragung durch Zell-Zell-Kontakt verknüpft werden. Seine Expression wird durch entzündliche Signalwege einschließlich NF-κB und JAK/STAT als Antwort auf Stimuli wie TNF-α und IL-1 reguliert und koordiniert so Leukozytenrekrutierung und vaskuläre Aktivierung. Eine fehlregulierte ICAM-1-Biologie wird häufig in Modellen von Autoimmunität, Infektion, chronischer Entzündung und Tumor–Immun-Interaktionen untersucht, in denen Adhäsion und Zellverkehr (Trafficking) die Gewebepathologie prägen.
ICAM-1/CD54 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Icam1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Icam1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Icam1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Icam1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.