Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Iba1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419058
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Iba1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Iba1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Iba1 Anticuerpo (1022-5): sc-32725
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Iba1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419058 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Aif1 codifica la molécula adaptadora 1 de unión a calcio ionizado (Iba1), una proteína citosólica con motivo EF-hand altamente enriquecida en microglía y otras células de linaje mieloide. Iba1 participa en la remodelación del citoesqueleto de actina, la formación de ondulaciones de membrana y la fagocitosis, apoyando la vigilancia inmunitaria innata y los programas de señalización inflamatoria en el sistema nervioso central. Mediante interacciones que influyen en la motilidad dependiente de Rac/Rho y en las respuestas a la dinámica del calcio, Iba1 contribuye a los estados de activación de la microglía y a las respuestas al daño tisular. La expresión alterada de Aif1/Iba1 se utiliza ampliamente como marcador de neuroinflamación y se ha asociado con fenotipos microgliales patológicos en modelos de enfermedades neurodegenerativas y neuroinmunes.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Iba1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aif1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aif1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aif1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Iba1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aif1 para la investigación de la señalización de Iba1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Aif1 críticos para la función de Iba1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aif1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Iba1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Iba1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aif1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Iba1 (m) y el plásmido HDR Iba1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aif1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aif1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.