Plasmide Double Nickase (h) HuD: sc-400132-NIC

ELAVL4 code HuD, une protéine de liaison à l'ARN enrichie dans les neurones, appartenant à la famille ELAV/Hu, qui reconnaît des éléments riches en AU afin de réguler la stabilité des ARNm, l'épissage alternatif et la traduction. HuD coordonne des programmes de contrôle post-transcriptionnel de l'expression génique qui soutiennent la différenciation neuronale, la croissance axonale, la plasticité synaptique et le remodelage dépendant de l'activité, en s'intégrant à la dynamique des granules de stress et au transport des ARN dans les neurites. Un dérèglement de la fonction et de l'expression d'ELAVL4/HuD a été associé à une maturation neuronale altérée et à des perturbations du métabolisme des ARN dans des contextes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, et ELAVL4 est également utilisé comme marqueur de lignée neuronale en biologie des tumeurs cérébrales et dans les syndromes neurologiques paranéoplasiques. Ces caractéristiques font d'ELAVL4 un nœud utile pour étudier les régulons d'ARN neuronaux, la sélection des isoformes de transcrits et le remaniement des réseaux protéine–ARN.

HuD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELAVL4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELAVL4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELAVL4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELAVL4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.