HuC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400172

Descripción general

ELAVL3 (HuC) es una proteína de unión a ARN enriquecida en neuronas de la familia Hu/ELAV que reconoce elementos ricos en AU y regula la estabilidad del ARNm, el empalme (splicing), la localización y la traducción en neuronas en desarrollo y maduras. Al controlar programas posranscripcionales vinculados a la diferenciación neuronal, la función sináptica y el crecimiento de neuritas, ELAVL3 contribuye a moldear la expresión génica dependiente de la actividad y la homeostasis neuronal. La regulación alterada de las redes de ARN de la familia ELAV se ha asociado con procesos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, y ELAVL3 se utiliza con frecuencia como marcador y como punto de entrada mecanístico para estudiar la identidad neuronal. El mapeo de los regulones de ARN dependientes de ELAVL3 respalda la investigación de vías del metabolismo del ARN que influyen en la excitabilidad, la plasticidad sináptica y las respuestas al estrés en modelos neuronales humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HuC (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ELAVL3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ELAVL3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ELAVL3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HuC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ELAVL3 para la investigación de la señalización de HuC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ELAVL3 críticos para la función de HuC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ELAVL3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HuC CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HuC CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ELAVL3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HuC (h) y el plásmido HDR HuC (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ELAVL3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ELAVL3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.