HuB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400169

Übersicht

ELAVL2 (HuB) ist ein in Neuronen angereichertes RNA-bindendes Protein der ELAV/Hu-Familie, das AU-reiche Elemente erkennt, um die Prozessierung von prä-mRNA, die Stabilität, Lokalisation und Translation von mRNA zu regulieren. Durch die Gestaltung posttranskriptioneller Genexpressionsprogramme trägt HuB zur neuronalen Differenzierung, synaptischen Entwicklung und aktivitätsabhängigen Plastizität bei, indem es Transkripte kontrolliert, die an Neurogenese und Zytoskelettdynamik beteiligt sind. ELAVL2-assoziierte RNA-Regulons überschneiden sich mit Signalwegen, die die Festlegung des Zellschicksals und Stressantworten steuern, und veränderte Expressionsmuster wurden in Zusammenhängen mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Erkrankungen sowie bei einigen malignen Erkrankungen des Nervensystems beschrieben. Diese Eigenschaften machen ELAVL2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie der RNA-Stoffwechsel die neuronale Identität und Dysfunktion beeinflusst.

Das HuB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ELAVL2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ELAVL2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ELAVL2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HuB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ELAVL2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HuB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ELAVL2-Exone abzielen, die für die HuB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ELAVL2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HuB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HuB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ELAVL2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HuB HDR-Plasmid (h) und HuB HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ELAVL2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ELAVL2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.