HSPA5/BiP/GRP78 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400073-LAC

HSPA5 kodiert BiP/GRP78, ein Chaperon der HSP70-Familie im endoplasmatischen Retikulum (ER), das an neu synthetisierte Polypeptide bindet und die Qualitätskontrolle der Proteinfaltung reguliert. Als zentraler Sensor der ER-Homöostase moduliert HSPA5 die Unfolded-Protein-Response (UPR) über Interaktionen, die die Signalwege von PERK, IRE1 und ATF6 beeinflussen, und verknüpft so die Proteostase mit dem ER-assoziierten Abbau (ERAD), der Calciumhomöostase und oxidativen Stressantworten. Eine fehlregulierte HSPA5-Aktivität wird häufig im Kontext chronischen ER-Stresses untersucht, darunter die Anpassung von Krebszellen, Stoffwechselerkrankungen und Neurodegeneration, bei denen veränderte Proteostase und UPR-Signalgebung zum zellulären Überleben und zu entzündlichen Signalwegen beitragen. Da BiP/GRP78 die Sekretion und die Reifung von Membranproteinen beeinflusst, ist es auch für Studien zur Prozessierung viraler Proteine und zu Wirt–Pathogen-Interaktionen relevant.

HSPA5/BiP/GRP78 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HSPA5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HSPA5/BiP/GRP78 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HSPA5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HSPA5/BiP/GRP78-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HSPA5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.