HSPA1L Double Nickase Plasmid (h): sc-400479-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSPA1L Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSPA1L Double-Nickase-Plasmid (h) und HSPA1L Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPA1L abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSPA1L: sc-393297
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSPA1L Double Nickase Plasmid (h) | sc-400479-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSPA1L Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400479-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA1L kodiert ein stressinduzierbares Mitglied der HSP70-Chaperonfamilie, das die Protein-Homöostase unterstützt, indem es an ungefaltete Polypeptide bindet und deren erneute Faltung, Transport oder die Weiterleitung zum Abbau koordiniert. HSPA1L ist an zellulären Proteostase-Netzwerken beteiligt, darunter Signalwege der Hitzeschockantwort, durch Co-Chaperone regulierte ATPase-Zyklen sowie die Wechselwirkung mit Ubiquitin-Proteasom- und Autophagie-Wegen bei proteotoxischem Stress. Durch die Modulation der Proteinfaltungskapazität und der Stressresilienz ist HSPA1L in Kontexten relevant, in denen das Chaperon-Gleichgewicht das Überleben von Zellen, die Differenzierung sowie immunologische oder reproduktionsbiologische Prozesse beeinflusst. Eine fehlregulierte Chaperonaktivität wurde mit veränderter Stresstoleranz und krankheitsassoziierten Störungen der Proteinkontrolle in Verbindung gebracht, wodurch HSPA1L ein nützliches Ziel für mechanistische Studien der Proteostase ist.
HSPA1L Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPA1L-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPA1L abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPA1L-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPA1L-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.