Partículas Lentivirales de Activación (h) HSP70-2: sc-417733-LAC

HSPA1B codifica la chaperona inducible HSP70-2, un componente central de la respuesta celular al choque térmico que salvaguarda la proteostasis durante el estrés térmico, oxidativo e inflamatorio. HSP70-2 se une a regiones hidrofóbicas expuestas en proteínas nacientes o mal plegadas para evitar su agregación y favorece el replegamiento en coordinación con las cochaperonas HSP40/DNAJ y los factores de intercambio de nucleótidos. A través de sus funciones en el control de calidad de proteínas, la interacción con la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y la regulación de la apoptosis y de la señalización inmunitaria innata, HSP70-2 influye en las decisiones de supervivencia celular bajo estrés. La actividad desregulada de la familia HSP70 se ha asociado con estados proteotóxicos e inflamatorios, lo que convierte a HSPA1B en una diana útil para estudios mecanísticos de las vías de adaptación al estrés.

Las partículas de activación lentiviral HSP70-2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HSPA1B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HSP70-2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HSPA1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HSP70-2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HSPA1B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.