HSP 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402810

概要

DNAJB1は、ヒトのHSP40共シャペロン（DnaJ homolog subfamily B member 1）をコードしており、HSP70のATPアーゼ活性を促進することで、誤折りたたみクライアントタンパク質の折りたたみ・再折りたたみ・選別（トリアージ）を促す、プロテオスタシスの主要な調節因子です。Jドメイン依存的なHSP70との相互作用を介して、HSP40は細胞質におけるタンパク質品質管理、ストレス応答、さらにプロテアソームおよびオートファジー関連経路を通じたシャペロン介在分解の協調を支えます。DNAJB1の機能は、熱ショックをはじめとする各種のプロテオトキシックストレス下での細胞の耐性に関与しており、シャペロンネットワークの変調はタンパク質凝集性疾患やがんにおけるストレス適応としばしば関連づけられます。DNAJB1に関わる再発性の疾患関連事象として、線維層状癌（fibrolamellar carcinoma）で観察されるDNAJB1–PRKACA融合があり、明確な遺伝学的背景のもとでシャペロン生物学を研究するうえで、DNAJB1に焦点を当てたモデルが有用であることを示しています。

HSP 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNAJB1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNAJB1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNAJB1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HSP 40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HSP 40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNAJB1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HSP 40の機能に不可欠なDNAJB1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNAJB1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HSP 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHSP 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNAJB1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HSP 40 HDRプラスミド（h）および HSP 40 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNAJB1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNAJB1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。