Plásmido Doble Nickase (h) HSP 40-4: sc-403819-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HSP 40-4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HSP 40-4 (h) y el plásmido de doble nickasa HSP 40-4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DNAJA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HSP 40-4 Anticuerpo (KA2A5.6): sc-59554
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HSP 40-4 | sc-403819-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HSP 40-4 | sc-403819-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAJA1 codifica la cochaperona humana de la familia HSP40 HSP40-4 (también conocida como Hdj2), una proteína con dominio J que estimula la actividad ATPasa de HSP70 para favorecer el plegamiento, replegamiento y control de calidad de las proteínas. A través de interacciones con HSP70 y proteínas cliente, DNAJA1 contribuye a la proteostasis en el citosol y en interfaces asociadas a orgánulos, influyendo en las respuestas al estrés, el tráfico proteico y vías de degradación como el sistema ubiquitina–proteasoma. La desregulación de redes de chaperonas que involucran a DNAJA1 se ha vinculado con una tolerancia celular alterada al estrés proteotóxico, con relevancia para la biología del cáncer y la neurodegeneración, donde la carga de proteínas mal plegadas y la señalización de estrés son prominentes. La función de DNAJA1 también se estudia en el contexto de interacciones huésped–patógeno y de la estabilidad de vías de señalización, lo que refleja su papel en el mantenimiento de complejos proteicos funcionales.
HSP 40-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNAJA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNAJA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNAJA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNAJA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.