hSNF2H CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403825-ACT

SMARCA5 kodiert den humanen ISWI‑ATP‑abhängigen Chromatin-Remodeler hSNF2H, eine katalytische Untereinheit, die Nukleosomen repositioniert und so die Zugänglichkeit des Chromatins reguliert. hSNF2H unterstützt DNA-Replikation und -Reparatur, die transkriptionelle Kontrolle sowie die Organisation höherstufiger Chromatinstrukturen über Remodeling-Komplexe wie ACF, CHRAC, WICH und RSF. Durch die Koordination der Nukleosomenabstände und die Förderung der replizierungsgekoppelten Chromatinassemblierung beeinflusst SMARCA5 den Zellzyklusverlauf und Signalwege der Genomstabilität. Fehlreguliertes Chromatin-Remodeling und veränderte SMARCA5‑Aktivität werden mit proliferativen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und machen SMARCA5 zu einem nützlichen Ziel, um epigenetische Mechanismen zu untersuchen, die krankheitsrelevanten Genexpressionsprogrammen zugrunde liegen.

hSNF2H Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SMARCA5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

hSNF2H Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SMARCA5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SMARCA5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen hSNF2H-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SMARCA5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von hSNF2H-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des hSNF2H-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SMARCA5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.