Plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST5 (h): sc-415157

Présentation

HS3ST5 code l’héparane sulfate–glucosamine 3‑O‑sulfotransférase 5, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la 3‑O‑sulfatation des résidus de glucosamine au cours de la biosynthèse des protéoglycanes d’héparane sulfate. Cette modification contribue à définir la structure fine de l’héparane sulfate, en façonnant ses propriétés de liaison aux ligands, lesquelles influencent la communication cellule–cellule, l’adhérence et la distribution des morphogènes au sein de la matrice extracellulaire. En modulant les interactions dépendantes de l’héparane sulfate, HS3ST5 peut affecter des voies de signalisation telles que FGF, Wnt, Hedgehog et les réseaux de chimiokines qui régulent le développement et l’homéostasie tissulaire. Des profils de sulfatation de l’héparane sulfate dérégulés ont été associés à une disponibilité altérée des facteurs de croissance, à l’inflammation et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui fait de HS3ST5 une cible pertinente pour des études mécanistiques des modifications des glycosaminoglycanes liées aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HS3ST5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HS3ST5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HS3ST5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HS3ST5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HS3ST5 pour l'étude de la signalisation de HS3ST5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HS3ST5 essentiels à la fonction de HS3ST5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HS3ST5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HS3ST5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HS3ST5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HS3ST5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HS3ST5 plasmide HDR (h) et le HS3ST5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HS3ST5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HS3ST5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.