Plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST2 (h): sc-409766

Présentation

HS3ST2 code l’héparane sulfate‑glucosamine 3‑O‑sulfotransférase 2, une enzyme localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse la 3‑O‑sulfatation des chaînes d’héparane sulfate, générant des motifs de sulfatation rares qui modulent la liaison des ligands et la spécificité de signalisation. En façonnant les interactions héparane sulfate–protéines, HS3ST2 influence la biologie de la matrice extracellulaire et régule des voies telles que FGF, WNT, VEGF et la signalisation pilotée par les chimiokines, qui contrôlent l’adhésion cellulaire, la migration et la structuration des tissus. Une expression altérée de HS3ST2 ou son silençage épigénétique ont été rapportés dans de multiples contextes tumoraux et sont étudiés en lien avec l’invasion, le remodelage du microenvironnement associé aux métastases et une réponse déréglée aux facteurs de croissance. Son rôle dans la biosynthèse de l’héparane sulfate le relie aussi à des questions plus larges en biologie du développement et en inflammation, où les profils de sulfatation ajustent l’activation des récepteurs et la formation de gradients.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HS3ST2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HS3ST2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HS3ST2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HS3ST2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HS3ST2 pour l'étude de la signalisation de HS3ST2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HS3ST2 essentiels à la fonction de HS3ST2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HS3ST2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HS3ST2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HS3ST2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HS3ST2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HS3ST2 plasmide HDR (h) et le HS3ST2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HS3ST2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HS3ST2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.