Hrs Plásmido CRISPR/Cas9 KO (r): sc-437306

Descripción general

Hrs (sustrato de la tirosina quinasa regulado por el factor de crecimiento de hepatocitos; también conocido como HGS) es una proteína de clasificación endosomal que actúa dentro del complejo ESCRT-0 para reconocer proteínas de membrana ubiquitinadas y dirigir su tráfico hacia cuerpos multivesiculares para su degradación lisosomal. Al coordinar la maduración endosomal y la disminución de receptores, Hrs influye en las salidas de señalización de los receptores tirosina quinasa y de otros receptores de superficie, modulando vías que controlan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. Esta proteína es integral para el recambio de proteínas de membrana, el transporte de endosoma a lisosoma y la proteostasis, procesos que se examinan con frecuencia en estudios de neurodegeneración, inflamación y desregulación de la señalización oncogénica. En sistemas de rata, la alteración de Hrs favorece la investigación mecanística sobre cómo una clasificación endosomal modificada afecta las decisiones sobre el destino de los receptores y la reconfiguración de las vías aguas abajo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Hrs (r) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares rat. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Hrs.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de Hrs, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de Hrs
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Hrs CRISPR/Cas9 KO (r) y el plásmido Hrs CRISPR/Cas9 KO (r2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Hrs (r) y el plásmido HDR Hrs (r2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.