Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
HRI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420950
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HRI El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HRI, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HRI Anticuerpo (D-12): sc-365239
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HRI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420950 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Eif2ak1 codifica el inhibidor regulado por hemo (HRI), una cinasa de eIF2α sensible al estrés que fosforila EIF2S1 para atenuar la traducción global, a la vez que favorece la traducción selectiva de transcritos adaptativos al estrés. En células de ratón, HRI conecta la disponibilidad de hemo, el estrés oxidativo y el estrés proteotóxico con la respuesta integrada al estrés, coordinando la proteostasis, el equilibrio redox y la homeostasis mitocondrial. Este eje de señalización se interrelaciona con vías que controlan la biosíntesis de hemo y el metabolismo del hierro, y modula programas inflamatorios y apoptóticos bajo estrés celular. La desregulación del control translacional dependiente de HRI es relevante en modelos de anemia y hemoglobinopatías, neurodegeneración y fenotipos metabólicos o inflamatorios impulsados por el estrés, en los que la homeostasis de la síntesis proteica está alterada.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HRI (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eif2ak1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eif2ak1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eif2ak1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HRI.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eif2ak1 para la investigación de la señalización de HRI, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Eif2ak1 críticos para la función de HRI
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eif2ak1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HRI CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HRI CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eif2ak1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HRI (m) y el plásmido HDR HRI (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eif2ak1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eif2ak1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.