Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HPS-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404822
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HPS-4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HPS-4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HPS-4 Anticuerpo (A-6): sc-398070
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HPS-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404822 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
HPS4 codifica HPS-4, un componente central del complejo 3 de biogénesis de orgánulos relacionados con lisosomas (BLOC-3), que funciona como factor de intercambio de nucleótidos de guanina y regula el tráfico de membranas dependiente de Rab32/Rab38. A través de estas vías, HPS-4 favorece la clasificación y entrega de carga a los lisosomas y a los orgánulos relacionados con lisosomas, influyendo en la maduración de los melanosomas, la formación de los gránulos densos plaquetarios y la homeostasis endolisosomal. La alteración de HPS4 se asocia con el síndrome de Hermansky–Pudlak tipo 4, un trastorno caracterizado por defectos en la biogénesis de orgánulos y el transporte vesicular. Por ello, HPS4 se utiliza ampliamente para estudiar la dinámica endosomal, la maduración de orgánulos y los fenotipos celulares asociados a un tráfico lisosomal deficiente.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HPS-4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HPS4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HPS4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HPS4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HPS-4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HPS4 para la investigación de la señalización de HPS-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HPS4 críticos para la función de HPS-4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HPS4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HPS-4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HPS-4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HPS4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HPS-4 (h) y el plásmido HDR HPS-4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HPS4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HPS4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.