Plasmide CRISPR d'Activation (h) HPK1: sc-402367-ACT

Le gène humain MAP4K1 code la hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1), une kinase sérine/thréonine qui agit comme régulateur en amont de réseaux de signalisation situés en aval des récepteurs des antigènes et des cytokines. HPK1 intègre des signaux issus de complexes proximaux des récepteurs immunitaires pour moduler les cascades MAPK et les programmes transcriptionnels liés à NF-κB, influençant les seuils d’activation, la durée des signaux et les états de phosphorylation des protéines. Par ces voies, MAP4K1 intervient dans des processus cellulaires tels que la signalisation des récepteurs, la régulation transcriptionnelle et la dynamique de signalisation en réponse au stress. Les dérégulations de l’activité d’HPK1 et de ses profils d’expression sont étudiées dans le contexte des déséquilibres de la signalisation immunitaire et de la biologie associée à l’inflammation, avec un intérêt supplémentaire pour les interactions tumeur–système immunitaire en recherche sur le cancer.

HPK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP4K1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HPK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP4K1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP4K1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HPK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP4K1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HPK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HPK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP4K1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.