HoxC6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403393-ACT

HOXC6 kodiert den menschlichen Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxC6, einen DNA-bindenden Regulator, der während der embryonalen Entwicklung dazu beiträgt, die anteroposteriore Musterbildung und Zellschicksalsentscheidungen festzulegen. In differenzierten Geweben wirkt HOXC6 an Transkriptionsprogrammen mit, die Proliferation, Migration und epitheliale Differenzierung steuern – über kontextabhängige Interaktionen mit Kofaktoren, die Chromatin- und Enhancer-Aktivität prägen. Eine fehlregulierte HOXC6-Expression wurde in mehreren Tumorarten beschrieben und wird häufig im Hinblick auf ihre Rolle bei Linienplastizität, invasionsassoziierter Genexpression und veränderten Differenzierungszuständen untersucht. Als Entwicklungsregulator mit großer transkriptioneller Reichweite ist HOXC6 für die Forschung zu Morphogenese, onkogenen Transkriptionsnetzwerken und genregulatorischen Schaltkreisen relevant.

HoxC6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOXC6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxC6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOXC6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOXC6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxC6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOXC6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxC6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxC6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOXC6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.