Partículas Lentivirales de Activación (m2) HoxB5: sc-420914-LAC-2

El gen murino Hoxb5 codifica el factor de transcripción con homeobox HOXB5, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que ayuda a establecer la organización anteroposterior y la identidad segmentaria durante la embriogénesis. HOXB5 modula programas de expresión génica que controlan la diferenciación mesodérmica y neural, coordinando vías del desarrollo implicadas en la morfogénesis tisular, la formación vascular y del tracto respiratorio, y la especificación de linajes hematopoyéticos. La actividad desregulada de HOXB5 y las alteraciones en el equilibrio de la red HOX se han vinculado con anomalías del desarrollo y se han asociado con estados transcripcionales oncogénicos en modelos de neoplasias hematológicas, lo que convierte a Hoxb5 en un locus útil para explorar la diferenciación, la autorrenovación y el compromiso de linaje. La edición génica de Hoxb5 en sistemas murinos respalda estudios mecanísticos de elementos cisreguladores, circuitería transcripcional y fenotipado del desarrollo in vivo a lo largo de la organogénesis y en contextos de células madre/progenitoras.

Las partículas de activación lentiviral HoxB5 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hoxb5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HoxB5 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hoxb5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HoxB5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hoxb5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.