Plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxB5 (h): sc-409631

Présentation

HOXB5 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB5, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de séquence, qui contribue à établir la polarité antéro-postérieure et l’identité tissulaire au cours du développement embryonnaire. HoxB5 participe à des programmes transcriptionnels en aval de la signalisation par des morphogènes du développement, notamment des voies répondant à l’acide rétinoïque, afin de coordonner la spécification des lignages, la prolifération et la différenciation. Chez l’adulte, une expression dérégulée de HOXB5 a été associée à une altération du contrôle des états cellulaires et à des réseaux transcriptionnels aberrants observés dans de multiples jeux de données portant sur des cancers et des maladies hématopoïétiques. En tant que régulateur nucléaire, HoxB5 est couramment étudié pour cartographier les circuits de régulation génique, la logique enhancer–promoteur et les mécanismes de reprogrammation du développement dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxB5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HOXB5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HOXB5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HOXB5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HoxB5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HOXB5 pour l'étude de la signalisation de HoxB5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HOXB5 essentiels à la fonction de HoxB5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HOXB5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HoxB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HoxB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HOXB5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HoxB5 plasmide HDR (h) et le HoxB5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HOXB5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HOXB5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.