HoxB2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404533-ACT

HOXB2 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxB2, einen DNA-bindenden Regulator, der während der Embryonalentwicklung zur Festlegung der anterior-posterioren Musterbildung und der segmentalen Identität beiträgt, insbesondere in Abstammungslinien des Hinterhirns und der Neuralleisten-Derivate. HoxB2 moduliert Genexpressionsprogramme, die die Festlegung des Zellschicksals, die Differenzierung und die Reaktion auf Morphogene steuern, über HOX-Transkriptionsnetzwerke sowie durch Interaktionen mit Kofaktoren wie PBX und MEIS. Eine fehlregulierte HOXB2-Expression wurde mit veränderter Entwicklungssignalgebung und aberranten transkriptionellen Zuständen in Krankheitskontexten beim Menschen in Verbindung gebracht, darunter Krebserkrankungen, bei denen HOX-Genprogramme Proliferation, Migration und Linienplastizität beeinflussen können. Als transkriptioneller Regulator stellt HoxB2 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um in Modellsystemen genregulatorische Schaltkreise und die Reaktivierung entwicklungsbiologischer Signalwege zu untersuchen.

HoxB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOXB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOXB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOXB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxB2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOXB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxB2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxB2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOXB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.