Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxA10: sc-401463-ACT

HOXA10 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA10, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique aux séquences, qui organise le développement embryonnaire et maintient l’identité des tissus adultes. Dans les cellules humaines, HoxA10 contribue à la régionalisation antéro-postérieure, à l’organogenèse et à la spécification des lignages en coordonnant des programmes transcriptionnels qui s’entrecroisent avec des réseaux de signalisation du développement tels que les voies répondant à l’acide rétinoïque et l’expression génique régulée par les hormones. Son activité est particulièrement pertinente pour la biologie utérine/endométriale et la différenciation hématopoïétique, où une expression modifiée peut faire basculer les états de prolifération et de différenciation. Une expression dérégulée de HOXA10 a été associée à des anomalies du développement et a été étudiée dans le contexte de troubles de la reproduction et du remodelage transcriptionnel lié aux hémopathies malignes.

HoxA10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXA10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxA10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXA10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXA10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxA10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXA10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxA10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxA10 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXA10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.