Plasmide Double Nickase (h) hnRNP L: sc-402196-NIC

Le gène humain **HNRNPL** code hnRNP L, une protéine liant l’ARN qui reconnaît des éléments riches en CA afin de coordonner l’épissage alternatif du pré‑ARNm, la stabilisation des transcrits et la maturation/gestion de l’ARN entre le noyau et le cytoplasme. hnRNP L agit au sein de complexes spliceosomaux et ribonucléoprotéiques pour moduler l’inclusion des exons et le couplage entre la transcription et la maturation de l’ARN, influençant des programmes tels que le contrôle du cycle cellulaire et l’expression génique en réponse au stress. En régulant l’expression spécifique des isoformes, hnRNP L peut moduler, au niveau post‑transcriptionnel, les sorties de signalisation, notamment les voies MAPK et celles liées à l’apoptose. Une activité dérégulée de hnRNP L et des altérations d’épissage ont été associées à des phénotypes prolifératifs et à des profils anormaux de maturation de l’ARN observés dans diverses maladies humaines, ce qui en fait une cible précieuse pour des études mécanistiques de la régulation génique dépendante de l’épissage.

hnRNP L Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HNRNPL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HNRNPL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HNRNPL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HNRNPL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.