hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402274

Übersicht

PCBP2 kodiert das humane RNA-bindende Protein hnRNP E2, einen Poly(C)-bindenden Faktor, der an einzelsträngige RNA bindet und dadurch das mRNA-Spleißen, die Stabilität, den nukleären Export und die Translation reguliert. hnRNP E2 ist an der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt, indem es Ribonukleoproteinkomplexe koordiniert, die das Schicksal von Transkripten und die Proteinproduktion bestimmen – darunter die Modulation der UTR-abhängigen translationalen Stilllegung sowie von Programmen der RNA-Prozessierung. Über diese Aktivitäten beeinflusst PCBP2 zelluläre Stressantworten sowie Signalwege der Proliferation und Differenzierung und wird häufig im Kontext einer fehlregulierten RNA-Metabolismus untersucht. Eine veränderte Funktion oder Expression von PCBP2/hnRNP E2 wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter onkogene Signalgebung und Veränderungen der Wirt–Virus-Interaktionen, die durch RNA-regulatorische Netzwerke vermittelt werden.

Das hnRNP E2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PCBP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PCBP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PCBP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die hnRNP E2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PCBP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der hnRNP E2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PCBP2-Exone abzielen, die für die hnRNP E2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PCBP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom hnRNP E2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom hnRNP E2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PCBP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das hnRNP E2 HDR-Plasmid (h) und hnRNP E2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PCBP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PCBP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.