Plásmido Doble Nickase (h) HNF-3γ: sc-401720-NIC

FOXA3 codifica el factor nuclear hepático 3 gamma (HNF-3γ), un factor de transcripción tipo forkhead/hélice alada que regula la accesibilidad de la cromatina y coordina programas de transcripción específicos de tejido durante el desarrollo del endodermo. En células diferenciadas, HNF-3γ contribuye a redes génicas del hígado y del epitelio gastrointestinal que controlan el metabolismo de la glucosa y los lípidos, el manejo de xenobióticos y la función secretora mediante interacciones con vías de receptores nucleares y de factores de transcripción hepatocitarios. La expresión alterada de FOXA3 o su circuito regulador se ha vinculado con una homeostasis metabólica desregulada y con cambios en el estado de linaje observados en trastornos hepatobiliares y gastrointestinales, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control transcripcional de la identidad celular. FOXA3 también se utiliza como marcador y modulador en modelos de reprogramación y diferenciación, donde la actividad de factor pionero determina el uso de potenciadores y promotores.

HNF-3γ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.