Plasmide Double Nickase (h) HNF-1α: sc-400594-NIC

HNF1A code le facteur nucléaire 1 alpha des hépatocytes (hepatocyte nuclear factor 1-alpha, HNF‑1α), un facteur de transcription à homéodomaine qui se lie à des éléments promoteurs et amplificateurs (enhancers) afin de réguler des programmes d'expression génique dans les hépatocytes, les cellules β pancréatiques, l'épithélium rénal et les tissus intestinaux. Il coordonne des voies impliquées dans la détection du glucose et la sécrétion d'insuline, le métabolisme des lipides et des acides biliaires, ainsi que la différenciation épithéliale, en partie via des réseaux transcriptionnels avec HNF4A et d'autres facteurs enrichis dans le foie. La perturbation de l'activité de HNF‑1α modifie l'expression de transporteurs et d'enzymes métaboliques, ce qui affecte l'homéostasie cellulaire et l'expression de gènes spécifiques de lignée. Des variants génétiques et fonctionnels de HNF1A sont associés à des phénotypes métaboliques monogéniques et complexes, ce qui en fait un nœud largement utilisé pour analyser le contrôle transcriptionnel du métabolisme.

HNF-1α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HNF1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HNF1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HNF1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HNF1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.