Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hmx3 (m): sc-420887

Présentation

Hmx3 (protéine homeobox Hmx3) est un facteur de transcription qui régule les programmes d’expression génique du développement grâce à une liaison à l’ADN spécifique de séquence et au contrôle des décisions de destinée cellulaire. Chez la souris, l’activité de Hmx3 est étroitement liée à la morphogenèse de l’oreille interne et à l’organisation du neurodéveloppement, en coordonnant des réseaux transcriptionnels en aval qui façonnent les structures sensorielles et la différenciation neuronale. La perturbation des circuits régulateurs dépendants des homeobox impliquant Hmx3 peut modifier la mise en place embryonnaire et l’organogenèse, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des phénotypes développementaux congénitaux et de la logique de régulation génique à l’origine de la formation des systèmes sensoriels. En tant que régulateur nucléaire, Hmx3 est souvent étudié dans le contexte du contrôle transcriptionnel, de la spécification de lignée et des interactions (cross-talk) entre voies de signalisation du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hmx3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hmx3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hmx3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hmx3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hmx3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hmx3 pour l'étude de la signalisation de Hmx3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hmx3 essentiels à la fonction de Hmx3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hmx3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hmx3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Hmx3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hmx3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hmx3 plasmide HDR (m) et le Hmx3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hmx3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hmx3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.