Plasmide CRISPR d'Activation (m) HMGI-C: sc-420880-ACT

Hmga2 code pour la protéine architecturale de la chromatine HMGI‑C, un facteur AT‑hook non histonique qui se lie à l’ADN riche en AT et remodèle la chromatine localement afin de moduler les programmes transcriptionnels. Dans les cellules de souris, HMGI‑C contribue à la régulation de la prolifération, de la différenciation et du calendrier du développement en influençant la communication entre enhancers et promoteurs ainsi que l’occupation des facteurs de transcription à l’échelle du génome. Il est fréquemment associé à des états de type cellules souches/progénitrices et à l’expression de gènes liée à la transition épithélio‑mésenchymateuse, en interaction avec des voies sensibles aux facteurs de croissance qui coordonnent la progression du cycle cellulaire et l’engagement de lignée. Une expression dérégulée ou des réarrangements de HMGA2/HMGI‑C sont associés à une croissance aberrante et à des signatures transcriptionnelles oncogéniques, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation génique guidée par la chromatine.

HMGI-C Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hmga2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HMGI-C Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hmga2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hmga2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HMGI-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hmga2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HMGI-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HMGI-C dans les cellules tumorales présentant une expression de Hmga2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.