HMGCR Plasmide Double Nickase (h): sc-400560-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HMGCR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HMGCR Double Nickase Plasmid (h) e il HMGCR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HMGCR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HMGCR Antibody (C-1): sc-271595
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HMGCR Plasmide Double Nickase (h) | sc-400560-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMGCR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400560-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGCR codifica la 3-idrossi-3-metilglutaril-CoA reduttasi, l’enzima limitante della via del mevalonato che converte l’HMG-CoA in mevalonato e regola la biosintesi de novo del colesterolo. Controllando il flusso nella produzione di steroli e isoprenoidi, HMGCR influenza la biogenesi delle membrane, la prenilazione delle proteine e gli output di segnalazione legati alla crescita cellulare e all’adattamento metabolico. L’attività di HMGCR è strettamente regolata dalla trascrizione dipendente da SREBP, dal feedback di rilevamento degli steroli e dalla degradazione associata al RE, integrando la disponibilità di lipidi con l’omeostasi cellulare. La disregolazione degli enzimi della via del mevalonato, incluso HMGCR, è spesso analizzata in studi sull’ipercolesterolemia, sui meccanismi di rischio dell’aterosclerosi e sul rimodellamento metabolico nel cancro e negli stati infiammatori.
HMGCR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HMGCR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HMGCR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HMGCR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HMGCR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.