Plásmido Doble Nickase (h) HMGCL: sc-403841-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HMGCL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HMGCL (h) y el plásmido de doble nickasa HMGCL (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HMGCL. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HMGCL Anticuerpo (63Z): sc-100548
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HMGCL | sc-403841-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HMGCL | sc-403841-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGCL codifica la liasa de 3‑hidroximetil‑3‑metilglutaril‑CoA, una enzima mitocondrial que cataliza el paso final de la cetogénesis y del catabolismo de la leucina al convertir HMG‑CoA en acetoacetato y acetil‑CoA. Esta actividad conecta el manejo mitocondrial del acetil‑CoA con el equilibrio energético celular durante el ayuno y otros tipos de estrés metabólico, y se integra con vías más amplias que controlan la oxidación de ácidos grasos, la anaplerosis y la homeostasis redox. La alteración de la función de HMGCL se asocia con errores innatos del metabolismo que afectan la producción de cuerpos cetónicos y la degradación de aminoácidos de cadena ramificada, por lo que es relevante para estudios de adaptación metabólica y fisiología mitocondrial. En biología del cáncer e inmunometabolismo, se ha investigado el metabolismo de cuerpos cetónicos dependiente de HMGCL como un factor que contribuye al uso de nutrientes y a estados de señalización bajo hipoxia o limitación de nutrientes.
HMGCL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HMGCL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HMGCL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HMGCL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HMGCL alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.