HLA-DRβ1 Double Nickase Plasmid (h): sc-406727-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HLA-DRβ1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HLA-DRβ1 Double-Nickase-Plasmid (h) und HLA-DRβ1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HLA-DRB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HLA-DRβ1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406727-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-DRβ1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406727-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DRB1 kodiert die Beta-Kette des HLA-DR‑MHC‑Klasse‑II‑Heterodimers, einen zentralen Vermittler der adaptiven Immunität, der extrazelluläre Peptidantigene CD4+‑T‑Zellen präsentiert. Die Expression von HLA‑DRβ1 und die Beladung mit Peptiden hängen vom endosomalen Antigenverarbeitungsweg ab, einschließlich des Transports der invarianten Kette (CD74) und des durch HLA‑DM vermittelten Peptidaustauschs; dadurch werden das T‑Zell‑Repertoire und Aktivierungsschwellen geprägt. Variationen oder eine veränderte Regulation von HLA‑DRB1 sind stark mit der Anfälligkeit für immunvermittelte Erkrankungen sowie mit transplantationsbezogener Alloreaktivität assoziiert, was seine Rolle für Antigenspezifität und Immuntoleranz widerspiegelt. Als hochpolymorpher Locus wird es häufig untersucht, um Mechanismen der Autoimmunität, Wirt‑Pathogen‑Interaktionen und die Dynamik der Antigenpräsentation in menschlichen Zellen zu verstehen.
HLA-DRβ1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HLA-DRB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HLA-DRB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HLA-DRB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HLA-DRB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.