Plásmido Doble Nickase (h) HLA-DMα: sc-404576-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HLA-DMα consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HLA-DMα (h) y el plásmido de doble nickasa HLA-DMα (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HLA-DMA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HLA-DMα Anticuerpo (NB-B33): sc-134356
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HLA-DMα | sc-404576-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HLA-DMα | sc-404576-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DMA codifica la cadena alfa de HLA-DM, una molécula no clásica del MHC de clase II que forma un heterodímero con HLA-DMB en compartimentos endosómicos/lisosomales tardíos de las células presentadoras de antígeno. HLA-DM cataliza el intercambio de péptidos en el MHC de clase II al retirar CLIP de HLA-DR/DP/DQ y estabilizar la carga de péptidos de alta afinidad, moldeando el inmunopeptidoma presentado a las células T CD4+. Esta actividad vincula a HLA-DMA con las vías de procesamiento y presentación de antígenos, el tráfico endosomal y la activación de la inmunidad adaptativa. La variación genética o la expresión alterada dentro de la región del HLA de clase II, incluidos componentes del sistema HLA-DM, se asocia con disrregulación inmunitaria y susceptibilidad a fenotipos de enfermedad autoinmunes e inflamatorios.
HLA-DMα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HLA-DMA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HLA-DMA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HLA-DMA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HLA-DMA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.