Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-C: sc-401517-ACT

HLA-C code une chaîne lourde classique du CMH de classe I qui forme un hétérodimère avec la β2‑microglobuline afin de présenter à la surface cellulaire des peptides traités de manière endogène, pour la surveillance des lymphocytes T CD8+. Dans le cadre du traitement et de la présentation de l’antigène, HLA-C intègre des contributions provenant de la génération de peptides par le protéasome, du transport dépendant de TAP vers le réticulum endoplasmique et du chargement des peptides, afin de façonner la composition de l’immunopeptidome. HLA-C sert également de ligand clé pour les récepteurs de type immunoglobuline des cellules tueuses (KIR), inhibiteurs et activateurs, exprimés par les cellules NK, influençant ainsi les seuils de reconnaissance immunitaire. La variation allélique et les modifications d’expression de HLA-C sont largement étudiées dans le contexte des infections, des processus inflammatoires et auto-immuns, des interactions immunitaires en cancérologie et de la compatibilité en transplantation.

HLA-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-C dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.