Plasmide Double Nickase (h) Histone Deacetylase 5 (HDAC5): sc-400659-NIC

HDAC5 code l’histone désacétylase 5, une HDAC de classe IIa qui module l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels en s’associant à des complexes corépresseurs et en désacétylant des substrats histoniques et non histoniques. Son activité est régulée de façon dynamique par une navette nucléo-cytoplasmique dépendante de la phosphorylation, reliant les signalisations calciques et kinasiques au contrôle de l’expression génique. HDAC5 constitue un nœud essentiel de voies gouvernant la différenciation musculaire, la plasticité neuronale et la transcription induite par le stress, notamment au sein de réseaux dépendants de MEF2. Une dérégulation de la fonction et de la localisation de HDAC5 a été impliquée dans des états épigénétiques anormaux associés à la biologie des cancers, au remodelage cardiaque et à des phénotypes neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation de la chromatine.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HDAC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HDAC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HDAC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HDAC5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.